深芬儀器CSY-E96D非洲豬瘟檢測方法非洲豬瘟快速檢測儀
- 實驗所需自備試驗器材*
- 檢測儀（450nm）
- 高精度加樣器及槍頭：10-200ul 1000-5000ul
- 37℃恒溫箱或水浴鍋
- 蒸餾水或去離子水
試劑盒組成：
試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
說明書 | 1份 | 1份 |
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封板膜 | 2片 | 2片 |
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密封袋 | 1個 | 1個 |
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酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
陰性對照 | 0.5ml*1管 | 0.5ml*1管 | 2-8℃保存 |
陽性對照 | 0.5ml*1管 | 0.5ml*1管 | 2-8℃保存 |
檢測抗原-HRP | 5 ml×1瓶 | 10 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
樣品稀釋液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
底物A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
底物B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
終止液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
20×濃縮洗滌液 | 15ml×1瓶 | 25ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
非洲豬瘟快速檢測儀試劑準備
1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。
- 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正常現(xiàn)象；放置室溫，輕搖均勻，待結(jié)晶*溶解后再配置洗滌液。可將20ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液，未用完的放回4℃
- 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
非洲豬瘟快速檢測儀試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被非洲豬瘟抗體的包被微孔中，依次加入標本、HRP標記的檢測抗原，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUT OFF值相比較，從而判定標本中非洲豬瘟（ASF）的存在與否。
非洲豬瘟快速檢測儀前處理方法
1：血清：使用不含熱源和內(nèi)素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞小心地分離
方法2：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉或甘素抗凝，離心30分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
5. 組織標本：將組織加入適量sheng理鹽搗碎，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清液
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
非洲豬瘟快速檢測儀CSY-E96D非洲豬瘟檢測方法czcz作步驟：
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置陰、陽性對照孔和樣本孔，陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL；
3. 待測樣本孔加待測樣本10μL，在加*40μL；
4. 隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗原100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光水浴鍋孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
李丹q 2072559023**3122752409
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