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235次豬弓形蟲 (Tox)酶聯免疫分析試劑盒使用目的:
本試劑盒用于測定豬血清,血漿及相關液體樣本中弓形蟲 (Tox)含量。
實驗原理
本試劑盒應用間接法測定標本中人弓形蟲 (Tox)水平。用純化的豬弓形蟲 (Tox)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的弓形蟲 (Tox)標準品和未知濃度的弓形蟲 (Tox)待檢樣品,溫育后,加入生物素標記的抗IgG抗體,再與鏈霉親和素-HRP結合,形成免疫復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的弓形蟲 (Tox)抗體呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中豬弓形蟲 (Tox)濃度。
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標本要求
1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
豬弓形蟲 (Tox)酶聯免疫分析試劑盒操作步驟
根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品,其余各步操作相同)、標準品孔、待測樣品孔。然后在標準品孔中加入標準品50μl,在樣本反應孔中先加入待測樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl(樣品zui終稀釋度為5倍),蓋上封板膜,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。
配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復4次,拍干。
加生物素標記的抗-IgG抗體:每孔加入生物素標記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘
洗滌:操作同4。
加鏈霉親和素-HRP:每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
洗滌:操作同4。
顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
測定:豬弓形蟲 (Tox)酶聯免疫分析試劑盒以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
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