生物素3´末端DNA標記試劑盒
Biotin 3' End DNA Labeling Kit
貨號：pierce-89818
規格：足夠用于20個標記反應
Biotin 3' End DNA Labeling Kit
貨號：pierce-89818
規格：足夠用于20個標記反應
Thermo Scientific生物素 3´ 末端 DNA標記試劑盒使用末端脫氧核苷酸轉移酶（TdT）催化非模板導向的核苷酸結合到DNA3’-OH末端1,2。TdT更傾向于選擇單鏈DNA作為底物，但它也可以標記3’粘性末端和平末端的雙鏈DNA，盡管效率較低。生物素 3´ 末端 DNA標記試劑盒可將1-3個生物素標記的核糖核苷酸（生物素-11-UTP）結合到DNA鏈3’末端。這種標記方法可以將生物素定位到探針的3’末端從而減少了雜交或序列特異性蛋白結合的干擾。生物素標記的DNA探針可應用于多種非同位素檢測應用，包括電泳遷移率實驗（EMSA）、DNA和RNA印跡、菌落雜交或原位雜交。
產品特點：
• 非同位素標記可以消除放射物的危險性及放射性廢物的處理問題
• DNA3’末端1-3個生物素標記的核糖核苷酸可以減少雜交或序列特異性蛋白結合造成的干擾
• 生物素標記的探針可至少穩定存放一年
• 快速有效的30分鐘標記程序
使用測序膠分析標記效率。10個不同的寡核苷酸片段（長度為21-25nt）使用生物素 3´ 末端 DNA標記試劑盒進行標記。TdT反應產物通過T4多核苷酸激酶（PNK）和（γ-32P）ATP進行放射性標記。PNK反應產物在20%丙烯酰胺/8M尿素/TBE中進行電泳。起始寡核苷酸的位置（沒有生物素）標記為“n”。通過TdT可介導每條DNA鏈參入一至兩個生物素標記的核糖核苷酸（位置分別為“n+1”和“n+2”）。標記效率從72%（ENBA正義鏈）至94%（Oct-1正義鏈）。試劑盒對照寡核苷酸的標記效率為88%-94%。
使用3’末端生物素標記雙鏈的EMSA結果。正義鏈和反義鏈通過生物素3’末標DNA記試劑盒進行標記后，在室溫雜交4小時，形成了含有圖示轉錄因子結合位點的雙鏈。通過Thermo Scientific LightShift Chemiluminescent EMSA Kit進行凝膠遷移實驗，每個結合反應需20飛摩爾的雙鏈DNA。轉錄因子來自于使用Thermo Scientific NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Extraction Reagents（Product # 78833）獲得的Hela細胞的核提取物（每個反應需要2ul或6-7ug蛋白）。在NFκB體系中，核提取物來自于經過TNF-α處理或不處理的Hela細胞。競爭反應含有200倍的非標記雙鏈，以此確定蛋白：DNA相互作用的特異性。
試劑盒組成：5xTdT反應緩沖液 1ml
末端脫氧核苷酸轉移酶（TdT） 50ul
生物素-11-UTP 100ul
非標記的對照寡核苷酸 140ul
生物素標記的對照寡核苷酸 40ul
末端脫氧核苷酸轉移酶（TdT） 50ul
生物素-11-UTP 100ul
非標記的對照寡核苷酸 140ul
生物素標記的對照寡核苷酸 40ul
生物素3´末端DNA標記試劑盒
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