樣品RNA的抽提:
①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1)紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。
產品名稱 | |
英文名稱 | Dicrocoelium dentriticum |
貨號 | YSP96621 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
熒光定量PCR試劑盒技術:
本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環形凸起,兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析,提供實驗報告給您。
赫斯特熒光燃料33342NCAM (CD56) (123C3) Mouse mAb4,4'-二氯偶酰
Fluo-3 AM;鈣熒光探針CD44 AntibodyN-叔丁氧羰基-L-天冬氨酸 1-叔丁酯
Indo 1-AM;鈣熒光探針Sox2 (D6D9) XP® Rabbit mAb3,6-二氯-4,5-二甲基噠
Fluo AM;鈣熒光探針Sox2 (D6D9) XP® Rabbit mAb5-羥基吡-2-羧酸
120;7-氨基-甲基(AMC)Nanog Antibody5-溴-1-戊
Duvelisib (IPI-145)Phospho-LAT (Tyr171) Antibody5-羥基-1-茚酮
間甲酸;間甲酸LDHA (C4B5) Rabbit mAb6-氨基-1,2,3,四氫-1-萘酮
5-溴-氯-3吲哚神經氨酸鈉鹽LDHA (C4B5) Rabbit mAb1-芐基-甲基-哌啶酮
ABEI;N-(氨丁基)-N-乙基異魯米諾Phospho-Tau (Ser404) (D2Z4G) Rabbit mAb (IHC preferred)5-溴異喹啉
TTAC;十四烷基*基氯化銨Phospho-LAT (Tyr191) Antibody6-溴異喹啉
DTAC;十二烷基*基氯化銨Phospho-LAT (Tyr191) Antibody叔丁基磺酰
十四烷基*基溴化銨(TTAB)PDE5 (P434) Antibody氟-2-羥基甲
十二烷基*基溴化銨eEF1A (D10A5) Rabbit mAb1-溴-2,二氟
CTAB;十六烷基*基溴化銨LCP1 (D1C3) Rabbit mAb氯-氟酚
CTAC;十六烷基*基氯化銨RCC1 Antibody氯-2-氟酚
十八烷基*基氯化銨Phospho-Rb (Ser780) (C84F6) Rabbit mAb溴-7-氮雜吲哚
STAB;十八烷基*基溴化銨Phospho-eIF4B (Ser422) Antibody溴-硝基三氟甲
十烷基*基溴化銨Phospho-eIF4B (Ser422) Antibody2,二氟吡啶
槍狀肝吸蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒肝X受體β(LXRβ)ELISA試劑盒SHP-1 造血細胞酸酶抗體100 ul
肝X受體α(LXRα)ELISA試劑盒PTPN4/MEG1 蛋白酪氨酸酸酶非受體型4抗體100 ul
甘油三酯(TG)ELISA試劑盒SHP2/SHIP2/PTPN11 蛋白酪氨酸酸酶非受體型11抗體100 ul
甘油-3-酸脫氫酶(GAPDH)ELISA試劑盒Phospho-SHIP2 (Tyr1135) 酸化蛋白酪氨酸酸酶2抗體20 ul
甘露糖寡糖1,2-α-甘露糖苷酶IA(MAN1A1)ELISA試劑盒Phospho-SHIP2 (Ser576) 酸化蛋白酪氨酸酸酶2抗體100 ul
甘膽酸(CG)ELISA試劑盒Phospho-SHIP2 (Tyr542) 酸化蛋白酪氨酸酸酶2抗體500µl
甘肽/甘素(GAL)ELISA試劑盒Phospho-SHIP2 (Tyr986/987) 酸化蛋白酪氨酸酸酶2抗體100 ul
甘氨酸ELISA試劑盒Phospho-SHIP2 (Tyr580) 酸化蛋白酪氨酸酸酶2抗體100 ul
干細胞因子受體(SCFR)ELISA試劑盒SIAH1 泛素連接酶Siah1抗體100 ul