PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別，進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

?
熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時，引物與該探針同時結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實(shí)驗(yàn)時間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
?
熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán)，收集一個熒光強(qiáng)度信號，這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
芐氧基甲(>98.0%(GC))5--8-喹啉

溴甲(>97.0%(GC))8-溴-5-喹啉

甲(>98.0%(GC))叔丁氧羰基氨基哌啶-1,二羧酸-1-芐酯

 羥基甲(>98.0%(GC)(T))溴 -6,7-二甲氧基喹啉

4'-基酮(>95.0%(GC))溴-6-氨基喹啉

基聯(lián)(>97.0%(GC))溴-6-甲氧基喹啉

基芐(>97.0%(GC)(T))溴-6-喹啉

(反-基環(huán)己基)甲(>98.0%(GC))溴-7-甲氧基喹啉

氟甲(>99.0%(GC))溴-7-喹啉

基-4'-羥基聯(lián)(>98.0%(GC))溴-7-羥基喹啉

庚基甲(>98.0%(GC))溴-8-甲氧基喹啉

(反-基環(huán)己基)(>98.0%(GC))溴-8-喹啉

對(>98.0%(GC))溴-8-羥基喹啉

1-溴-正辛基(>99.0%(GC)(T))溴吡啶-2-甲酸酯

丁基環(huán)己烷甲酸 (順反混合物)(>98.0%(GC)(T))溴吡啶-2-甲酰

甲基環(huán)己甲酸(順反異構(gòu)體混和物)(>98.0%(GC)(T))溴靛紅酸酐

反-甲基環(huán)己甲酸)(>98.0%(GC)(T))溴基四氫吡喃

反-基環(huán)己甲酸(>98.0%(T)(GC))7--羥基喹啉-羧酸
軍團(tuán)菌屬通用探針法熒光PCR檢測試劑盒多巴D1受體相互作用蛋白抗體Phospho-LKB1 (Thr189) /FITC  熒光素標(biāo)記酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶抗體IgG100 ul

Capicua蛋白抗體LN /FITC  熒光素標(biāo)記層粘連蛋白抗體IgG20 ul

碳酸酐酶6抗體Ingrin alpha 4,beta 7(LPAM-1)/FITC  熒光素標(biāo)記整合素α4β7抗體IgG100 ul

間隙連接蛋白29抗體HRH3/GPCR97/FITC  熒光素標(biāo)記組織H3受體抗體IgG100 ul

間隙連接蛋白29抗體HRH4/GPCR105/FITC  熒光素標(biāo)記組織H4受體抗體IgG100 ul

細(xì)胞表面趨化因子受體7抗體LOX-1/OLR1/FITC  熒光素標(biāo)記凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體抗體IgG100 ul

神經(jīng)母細(xì)胞瘤源性分泌蛋白抗體Lpin1 proin/FITC  熒光素標(biāo)記Lpin1 抗體IgG100 ul

染色質(zhì)修飾蛋白2B抗體Lpin1 proin/FITC  熒光素標(biāo)記Lpin1 抗體IgG20 ul

細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白1/微管蛋白折疊輔助因子B抗體LPL/FITC  熒光素標(biāo)記脂蛋白脂酶抗體IgG100 ul