特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Nosema ceranae |
貨號 | YSP97016 |
熒光染料的優(yōu)點:
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便;
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合;
價格便宜;
熒光染料的缺點:
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。?
熒光探針:
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。
正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點:
熒光背景低;
敏感性高;
雜交穩(wěn)定性高;
熒光光譜分辨率好;
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點:
成本高;
設計難度大;
只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。
由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
PCR技術(shù)的定量原理:
擴增曲線
在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。
PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。?
熒光定量PCR原理:
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。
一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。
內(nèi)皮素受體A(ETRA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 紫紅鏈霉菌 5g
相關(guān)血漿蛋白A2(PAPPA2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 節(jié)桿菌 1g
補體成分5a(C5a)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 猴頭菌 250mg
乳鐵傳遞蛋白(LTF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 尖頂鹽單胞菌 5g
乳鐵傳遞蛋白(LTF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 嗜果黑星菌 1g
乳鐵傳遞蛋白(LTF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 糞腸球菌 25g
髓過氧化物酶(MPO)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 努比鹵地無氧芽孢桿菌 5g
髓過氧化物酶(MPO)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 草酸青霉 100ml
蛋白C抑制因子(PCI)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 卡伍爾鏈霉菌 500ml
脯氨酰羧肽酶(PRCP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 擬胞囊菌 25g
衰老關(guān)鍵蛋白5(FBLN5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 多主葡萄殼菌 5g
纖維蛋白原(FG)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 膠胞 1g
牙本質(zhì)涎蛋白(DSPP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 美濃鏈霉菌 1g
神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 細黃鏈霉菌 250mg
皮質(zhì)醇結(jié)合球蛋白(CBG)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 水生鞘氨醇單胞菌 5g
腫瘤壞死因子配體超家族成員12(TNFSF12)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 1mol/L THF溶液 球孢白僵菌 100ml
補體3a(C3a)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 1mol/L THF溶液 鏈霉菌 25ml
膜聯(lián)蛋白A6(ANXA6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 米曲霉 1g
東方蜜蜂微孢子蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體ZCWCC1/FITC 熒光素標記ZCWCC1抗體IgG100 ul
凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體Z-DEVD-FMK/FITC 熒光素標記CASPASE3凋亡抑制劑IgG20 ul
凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體Zfp91/FITC 熒光素標記白血病相關(guān)新基因抗體IgG100 ul
4號染色體開放閱讀框34抗體ZNF217/FITC 熒光素標記鋅指脂蛋白217抗體IgG100 ul
酪蛋白激酶1γ3/CKI γ3抗體ZNF268(1a)/FITC 熒光素標記鋅指脂蛋白-1a抗體IgG100 ul
凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白9抗體ZNF268(1b)/FITC 熒光素標記鋅指脂蛋白-1b抗體IgG100 ul
膽固氧化酶抗體ZNF268(1c)/FITC 熒光素標記鋅指脂蛋白-1c抗體IgG100 ul
半胱酸蛋白酶蛋白14抗體ZNF300 /FITC 熒光素標記鋅指蛋白300抗體IgG20 ul
半胱酸蛋白酶蛋白5抗體ZNF307/FITC 熒光素標記鋅指蛋白307抗體IgG100 ul