樣品RNA的抽提:
①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1)紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。
產品名稱 | |
英文名稱 | Giardia lamblia |
貨號 | YSP96758 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
熒光定量PCR試劑盒技術:
本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環形凸起,兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析,提供實驗報告給您。
隱丹參酮(標準品)氯氯芐
隱丹參酮甲基芐
牛磺鵝去氧膽酸(標準品)對甲
隱綠原酸(標準品)對氯芐
印(標準品)對甲
鷹嘴豆芽素A(標準品)反-酰氯
鷹嘴豆芽素A氯甲
柚皮苷,川陳皮素溴甲
羽扇豆(標準品)對甲氧基
鳶尾苷(標準品)溴硫代甲
鳶尾黃素(標準品)基甲
原阿片(標準品)甲氧基芐
原花青素B2(標準品)5-氯吲哚-2-羧酸
原人參二(標準品)3,5-二氟
原人參三(標準品)乙酸甲酯
原薯蕷皂苷(標準品)溴乙酸乙酯
原蘇木素B/原巴西蘇木素(標準品)酸乙酯
遠志酸(標準品)酸乙酯
藍氏賈第鞭毛蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒通用轉錄因子IIA樣因子抗體COX4I1/FITC 熒光素標記細胞色素c氧化酶IV亞型1抗體IgG20 ul
自噬相關蛋白4D抗體COX7A2/FITC 熒光素標記細胞色素c氧化酶COX7A2抗體IgG100 ul
自噬相關蛋白9A抗體C-PC /FITC 熒光素標記C-藻藍素/藻藍蛋白抗體IgG100 ul
縮酶C抗體C-Peptide( C-PEP )/FITC 熒光素標記C-肽抗體IgG100 ul
谷草轉氨酶抗體CPSA/FITC 熒光素標記鼠抗復合前列腺特異性抗原單克隆抗體IgG20 ul
三酸腺苷結合轉運蛋白G超家族成員5抗體CPSF4/CPSF30/FITC 熒光素標記剪切和多聚腺苷酸化特異性因子4抗體IgG100 ul
三酸腺苷結合轉運蛋白G超家族成員8抗體CPT1A/FITC 熒光素標記抗肉毒棕櫚酰基轉移酶1A抗體IgG100 ul
酰基輔酶A脫氫酶長鏈抗體CR/FITC 熒光素標記鈣結合蛋白抗體IgG500 ul
酰基輔酶A脫氫酶中鏈抗體MO25 alpha/CAB39/FITC 熒光素標記鈣結合蛋白39抗體IgG100 ul