熒光定量PCR試劑盒技術:
產品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環形凸起,兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析,提供實驗報告給您。
產品名稱 | |
英文名稱 | Escherichia spp. |
貨號 | YSP96701 |
樣品RNA的抽提:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1)紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
NHS-biotin;生物素琥珀酰亞酯 Cadherin-6 (D3T3I) Rabbit mAb2,二酚
消旋腎上腺素;DL-腎上腺素AMPKα (D5A2) Rabbit mAb (Biotinylad)BOC-D-絲氨酸甲酯
雷貝拉唑鈉(標準品)Claudin-2 (E1H9O) Rabbit mAb2,5-二羥
雷貝拉唑鈉IκBα (44D4) Rabbit mAb3,二氯甲
頭孢克肟USP18 (D4E7) Rabbit mAb2,5-二
頭孢克肟(標準品)USP18 (D4E7) Rabbit mAb紅色KB/5-氯-2-
咪草煙IκBα (L35A5) Mouse mAb (Amino-rminal Antigen)2-氯-5-
O-去甲文拉法辛(R型)IκBα (L35A5) Mouse mAb (Amino-rminal Antigen)2,5-二氯
O-去甲文拉法辛(S型)RANK Ligand (L300) Antibody氯間二酚
奧美沙坦SP Antibody交酯
1,二氨基胍鹽酸鹽 GSK-3α (D80D1) XP® Rabbit mAb美羅培南側鏈
3,5-二-L-甲狀腺素,3,5-二甲腺原氨酸GABA(B)R2 (C44A4) Rabbit mAb(4R,5S,6S)-[[(3S,5S)-5-[(二甲基氨基)甲酰基-1-[[(硝基芐基)氧]羰基]-吡咯烷基]硫]-6-[(1R)-1-羥乙基]-甲基-7-氧代-1-氮雜雙環[3.2.0]庚-2--2-羧酸 硝基芐基酯
短葉松素(標準品)CREB (D76D11) Rabbit mAb美羅培南
環孢素D Akt (pan) (40D4) Mouse mAb (Biotinylad)甲基酸酯
帕比司他CDC20 Antibody2-氨基-1-丁
HDAC靶點抑制劑Cardiogenesis Marker Antibody Sampler Kit戊酮
鹽酸洛美利PAK2 (3B5) Mouse mAb乙酸甲酯
酯蟾毒配基;蟾力蘇(標準品)MacroH2A1.2 Antibody吡咯烷酮
埃希氏菌屬通用探針法熒光PCR檢測試劑盒鴨γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒ATH III /FITC 熒光素標記抗凝血酶Ⅲ抗體IgG100 ul
鴨β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒ATM/FITC 熒光素標記毛細血管擴張性共濟失調癥突變蛋白抗體IgG300 ul
蜥蜴ELISA試劑盒Phospho-PAK4 (Ser99)/FITC 熒光素標記酸化p21激活激酶4抗體IgG100 ul
蜥蜴孕激素/孕酮(PROG)ELISA試劑盒ATP2c1/Ca++ ATPase/FITC 熒光素標記鈣離子ATP酶通道蛋白抗體IgG20 ul
蜥蜴雄二酮(ASD)ELISA試劑盒ATP4B/H+K+ ATPase/FITC 熒光素標記氫鉀ATP酶通道蛋白抗體IgG100 ul
蜥蜴生長激素(GH)ELISA試劑盒ATP5j/FITC 熒光素標記ATP合成酶H+轉運線粒體F0復合體亞基F6抗體IgG100 ul
蜥蜴*狀腺原氨酸(T3)ELISA試劑盒ATP7A/FITC 熒光素標記銅轉運蛋白質α鏈抗體IgG20 ul
蜥蜴甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒ATP7B/FITC 熒光素標記銅轉運蛋白質β鏈抗體IgG100 ul
蜥蜴睪酮(T)ELISA試劑盒phospho-ATP citra lyase(Ser455) /FITC 熒光素標記兔抗、大、三酸腺檸檬酸裂解酶抗體IgG20 ul