樣品RNA的抽提:
①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1)紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Streptococcus pneumoniae |
貨號 | YSP97230 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
熒光定量PCR試劑盒技術(shù):
本實用新型技術(shù)公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋,側(cè)蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環(huán)形凸起,兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內(nèi)部設有固定桿,固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側(cè)均設置有收納槽。本實用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側(cè)蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實驗報告給您。
石蠟切片組織衰老特異性脂褐素靛酚原位直接染色試劑盒 LIN7A ELISA Kit 20 ul
細胞衰老特異性早期脂褐素蘇丹黑原位染色試劑盒(與紅細胞無法分別) LIN28B ELISA Kit 300 ul
全組織衰老特異性早期脂褐素蘇丹黑原位染色試劑盒 LITAF ELISA Kit 100 ul
冰凍切片組織衰老特異性早期脂褐素蘇丹黑原位染色試劑盒 LIN7B(Protein lin-7 homolog B) ELISA Kit 100 ul
石蠟切片組織衰老特異性早期脂褐素蘇丹黑原位間接染色試劑盒 Liprin alpha 1 ELISA Kit 100 ul
石蠟切片組織衰老特異性早期脂褐素蘇丹黑原位直接染色試劑盒 LIV-1 ELISA Kit 100 ul
細胞衰老特異性脂褐素尼羅籃原位染色試劑盒(與紅細胞無法分別) LMBR1L ELISA Kit 100 ul
全組織衰老特異性脂褐素尼羅籃原位染色試劑盒 LMF2 ELISA Kit 100 ul
冰凍切片組織衰老特異性脂褐素尼羅籃原位染色試劑盒 LIN7A ELISA Kit 100 ul
石蠟切片組織衰老特異性脂褐素尼羅籃原位間接染色試劑盒 LIN28B ELISA Kit 1 liter
石蠟切片組織衰老特異性脂褐素尼羅籃原位直接染色試劑盒 LHPP ELISA Kit 100 ul
細胞衰老特異性晚期脂褐素堿性品紅(ZIEHL-NEELSEN)原位染色試劑盒 LIN7C ELISA Kit 20 ul
全組織衰老特異性晚期脂褐素堿性品紅(ZIEHL-NEELSEN)原位染色試劑盒 LILRA5 ELISA Kit 100 ul
冰凍切片組織衰老晚期特異性脂褐素堿性品紅(ZIEHL-NEELSEN)原位染色試劑盒 LIN7B(Protein lin-7 homolog B) ELISA Kit 100 ul
石蠟切片組織衰老特異性晚期脂褐素堿性品紅(ZIEHL-NEELSEN)原位間接染色試劑盒 LILRA4 ELISA Kit 100 ul
石蠟切片組織衰老特異性晚期脂褐素堿性品紅(ZIEHL-NEELSEN)原位直接染色試劑盒 LIMD2 ELISA Kit 20 ul
肺炎鏈球菌探針法熒光PCR檢測試劑盒胰腺衍生因子抗體tau human 微管相關蛋白100 ul
補體因子H抗體GDNF 神經(jīng)膠質(zhì)細胞系衍化神經(jīng)營養(yǎng)因子100 ul
酸化Fas死亡結(jié)構(gòu)域相關蛋白抗體BFGF 性成纖維細胞因子20 ul
Fas相關1因子抗體HGF 肝細胞生長因子100 ul
酸化粘著斑激酶抗體NE(Humen) 去甲腎上腺素100 ul
纖維細胞生長因子結(jié)合蛋白抗體DA 多巴100 ul
FBXO24蛋白抗體NT-3 神經(jīng)營養(yǎng)素-3100 ul
FBXO27蛋白抗體NT-4 神經(jīng)營養(yǎng)素-4100 ul
FBXO4蛋白抗體NAP 中性粒細胞活化肽100 ul