樣品RNA的抽提:
①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1)紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。
產品名稱 | |
英文名稱 | Haplosporidium costale |
貨號 | YSP96782 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
熒光定量PCR試劑盒技術:
本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環形凸起,兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析,提供實驗報告給您。
Galerone (TOK001)(R)-哌-2-羧酸
山柰酚-槐二糖-7-鼠李糖苷(1S,2R)-(-)-1-氨基-2-茚
己酮可可(標準品)5,5-二甲基-1,環己二酮
波必利(標準品)酮肟
醉魚草皂苷IVb(標準品)羥基脲
二酸倍他米松(標準品)酸
厄多司坦(標準品)無水醋酸鈉
吡美莫司;匹美莫司二二茂鈦
托拉塞米(標準品)酮酸
萘哌地爾四
萘哌地爾(標準品)N,N-二甲基酰
厄貝沙坦(標準品)(2-吡啶基)-甲
馬來酸替加色羅(標準品) B
三雙脒(標準品)磺酸鈉
焦地黃甙B1(標準品)1-氨基-1-環基鹽酸鹽
N-6022N-溴代丁二酰亞
巴柳氮鈉(標準品)N-代丁二酰亞
3,4,5-*酸(標準品)抗氧劑264
沿岸單孢子蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒細胞周期后期促進蛋白亞基11抗體E2F1/FITC 熒光素標記轉錄因子E2F-1抗體IgG100 ul
腺瘤性結腸息肉病蛋白2抗體E2F2/FITC 熒光素標記轉錄因子E2F-2抗體IgG100 ul
酸化細胞分裂周期蛋白16抗體E2F3/FITC 熒光素標記轉錄因子E2F-3抗體IgG100 ul
DNA修復酶相互作用蛋白抗體E2F4/FITC 熒光素標記轉錄因子E2F-4抗體IgG100 ul
脂肪細胞膜相關蛋白抗體E2F5/FITC 熒光素標記轉錄因子E2F-5抗體IgG100 ul
載脂蛋白A1結合蛋白抗體抗體E2F6/FITC 熒光素標記抗轉錄因子E2F-6抗體IgG100 ul
載脂蛋白B-mRNA編輯酶復合物1抗體E2 tag/FITC 熒光素標記E2 tag標簽抗體IgG100µg
載脂蛋白B-mRNA編輯酶復合物2抗體E2 tag/HRP 辣根過氧化物酶標記E2 tag標簽抗體IgG100 ul
載脂蛋白B-mRNA編輯酶復合物3B抗體E7 proin/FITC 熒光素標記頭瘤病毒16型E7抗體IgG20 ul