大鼠表皮生長因子（EGF）試劑盒使用說明書

使用目的：

本大鼠表皮生長因子試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本表皮生長因子（EGF）含量。

實驗原理
本大鼠表皮生長因子試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠表皮生長因子（EGF）水平。用純化的大鼠表皮生長因子（EGF）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入表皮生長因子（EGF），再與HRP標記的表皮生長因子（EGF）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的表皮生長因子（EGF）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠表皮生長因子（EGF）濃度。 

試劑盒組成 
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品（960pg/ml） 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個

標本要求 
1．大鼠表皮生長因子標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
480pg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
240pg/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
120pg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
60pg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
30pg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：大鼠表皮生長因子用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：大鼠表皮生長因子以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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