每個ELISA試驗都要做標準曲線,實驗新手剛接觸ELISA試劑實驗的時基本上都是不知所措,尤其是實驗做完后需要分析數據繪制標準曲線圖更是茫然。鑒于經常有實驗新手客戶向我司技術部反映標準曲線圖繪制問題,我司技術部根據自身多年的工作經驗詳細整理了繪制標曲的步驟流程,供廣大新老客戶參考。
1、擬和曲線:
輸入*行: 濃度值, 如0 10 50 100 400
輸入第二行:該濃度下的調整后的od值,如0 0.586 1.397 1.997 3.42
選擇這些輸入的數據,用插入里的圖表按鈕,進入圖表向導,在“標準類型"中選擇“xy散點圖";在“子圖表類型"中選擇“折線散點圖",按“下一步";選擇“系列產生在行",按“下一步";數據標志,可以填寫:如數據y軸,OD值;數據x軸,濃度;按下一步,點擊完成。可得曲線圖。
單擊曲線,按右鍵,選擇“添加趨勢線",在類型中,選擇多項式;在選項中,選擇顯示公式,選擇顯示R平方值。
得到公式和R平方值。
也可以用上面說的方法: 雙擊圖表,把它輸入到圖表的數據中,就可以擬和曲線。
2、計算濃度:
*次實驗:
標準曲線為:
y = -4E-05x2 + 0.026x
R2 = 0.9745
為例,已知OD值,計算濃度。
由于y = -4E-05x2 + 0.026x,所以可以得到:
4E-05x2 -0.026x +y=0
ax2 +bx +y=0
a=4E-05;b= -0.026;
x=(-b-(b*b-4ay)(平方根)) /(2*a)
代入a,b,和y值,得
x=(0.026-(0.026*0.026-0.00016*y)(平方根))/(2*0.00004)
在excel里可以用以下公式表示:
x=(0.026-EXP(LN(0.026*0.026-0.00016*y)/2))/(2*0.00004)
通用公式為:
x=(-b-EXP(LN(b*b-4ay)/2))/(2*a)
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