牛白血病抗體ELISA試劑盒檢查

  試劑盒的制備及評價利用純化的gp51重組蛋白作為包被抗原研制了gp51-ELISA試劑盒，試劑盒主要成分包括：已包被抗原的96孔板、HRP標記的兔抗牛IgG和牛白血病陰性、陽性尺度血清。gp51重組蛋白的大量制備與純化將本實驗室已構建成功的含PET-32a-gp51表達載體的菌株復蘇，在大腸桿菌BL21中大量誘導表達，收集菌體經超聲波破碎，將包涵體通過Ni~(2+)親和層析柱進行純化，透析復性后用PAGE電泳檢測，得到純度較高的gp51重組蛋白。紫外光分光光度計檢測，重組蛋白濃度為0.216mg/mL。對試劑盒進行了特異性、敏捷度、重復性及保留期試驗，結果表明：試劑盒能特異地檢測牛白血病陽性尺度血清，與牛傳染性鼻氣管炎、藍舌病、牛病毒性腹瀉和赤羽病等陽性尺度血清均無交叉反應；用該試劑盒對牛白血病陽性尺度血清進行檢測，測定效價為1:256～1:512，敏捷度是AGIDT的4～8倍；重復性試驗，試劑盒批內差異為1.35%～4.11%，批間差異為3.49%～9.54%,分別小于10%和15%；保留期試驗，試劑盒-20℃保留期為6個月，4℃保留期為1個月。

  本研究在原有的研究基礎之上展開，將已構建并經鑒定準確的PET-32a-gp51表達菌株復蘇，在大腸桿菌BL21中大量誘導表達,通過純化及復性后得到純度高、免疫學活性好的gp51重組蛋白，參照已建立的間接gp51-ELISA方法，以此重組蛋白研制了檢測牛白血病病毒抗體的間接gp51-ELISA試劑盒，并進行了試劑盒的評價及初步應用研究。地方流行性牛白血病(Enzootic Bovine leukosis,EBL)是由牛白血病病毒(Bovine leukemia virus,BLV)引起的以淋巴細胞持續性增生為特征的傳染性腫瘤性疾病,主要發生于4～8歲的成年牛。因此自主高水平的檢測試劑盒對該病的防制具有重要意義。目前我國使用的牛白血病檢測試劑幾乎全部來自國外，價格昂貴，檢測本錢很高。該病幾乎遍布*各養牛國家，在我國某些牛群中血清陽性率達30%～50%，已成為牛的重要傳染病之一。