ELISA試劑盒斑點印跡雜交基本原理
①ELISA試劑盒先將膜在水中浸濕,再放到15×SSC中。
②將DNA樣品溶于水或TE,煮沸5min,冰中速冷。
③用鉛筆在濾膜上標好位置,將DNA點樣于膜上,每個樣品一般點5μl(2~10μg DNA)。
④將膜烘干,密封保存備用。
ELISA試劑盒與上法類似,每個樣品至多加10μg總RNA(經酚/或異硫氰酸胍提取純化),方法是將RNA溶于5μl DEPC水,加5μl甲醛/SSC緩沖液(10×SSC中含6.15mol/L甲醛),使RNA變性,然后取5-8μl點樣于處理好的濾膜上,烘干。
應用類似檢測細菌菌落的方法,ELISA試劑盒可以對細胞培養物的特異序列進行快速檢測,將整個細胞點到膜上,經NaOH處理,使DNA暴露、變性和固定,再按常規方法進行雜交與檢測。有人曾用此法從105個培養細胞中檢測到至少5pg的Epstein-Barr病毒DNA。完整細胞斑點印跡法可以用于篩選大量標本,因為它使細胞直接在膜上溶解,所以DNA含量甚至比常用的提取法還高,又不影響與32P標記的探針雜交,但它不適用于非放射性標記探針,因為DNA純度不夠,會產生高本底。
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