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在生化分析測量中,酶的測定比較復(fù)雜,要求條件較高,測試比較困難。一般生化分析儀只要酶的測定準(zhǔn)確,重復(fù)性好,其它項(xiàng)目的測定一般都會(huì)沒有問題。現(xiàn)就生化分析儀酶分析中常見的測試不準(zhǔn)確、重復(fù)性差的幾點(diǎn)原因進(jìn)行分析,以供使用者和維修工程師參考。
生化分析儀酶的測定一般用動(dòng)力學(xué)法進(jìn)行測試,其原理是在酶反應(yīng)的zui適條件下,用物理、化學(xué)或酶促反應(yīng)的分析方法,在反應(yīng)速度恒定期與被測物的活性或濃度成正比。計(jì)算方法有兩種:
1)法:
酶活力(U/L)=ΔA×(反應(yīng)液體積/樣品體積)×(1000/消光系數(shù))
2)相對(duì)法:
(U/L或mmol/L)=[ΔA(測定)/ΔA(標(biāo)準(zhǔn))]×標(biāo)準(zhǔn)物的活力或濃度
因此,生化分析儀酶的測定與許多條件有關(guān)。條件的設(shè)置,如:波長、溫度、參數(shù)、測試方法,延遲和測試時(shí)間,吸液量等。另外還與的試劑,樣品的采集、保存有關(guān),同時(shí)與及時(shí)進(jìn)行質(zhì)控,從一個(gè)樣品進(jìn)入另一個(gè)樣品測試時(shí)及時(shí)清洗也有很大關(guān)系。
例如GPT的測試一般選擇為:波長為340nm,測定時(shí)間為20秒,延遲時(shí)間為40秒,吸液量為350μl,溫度設(shè)定為37℃,試劑空白可任意選擇。
因此GPT的測試結(jié)果與以下幾點(diǎn)有關(guān):
1、340nm為波長低端,能量較低,同時(shí)340nm濾光片使用較多,易老化。所以波長漂移不準(zhǔn),半寬度變化都會(huì)影響測量的準(zhǔn)確度和重復(fù)性。
2、動(dòng)態(tài)法測試有延遲時(shí)間,測試時(shí)間要求。延遲時(shí)間在動(dòng)態(tài)法中為預(yù)反應(yīng)時(shí)間,測試時(shí)間在動(dòng)態(tài)法中為測試的總時(shí)間。零級(jí)動(dòng)力學(xué)法是針對(duì)特定時(shí)間段而言的,酶反應(yīng)剛啟動(dòng)時(shí)反應(yīng)比較復(fù)雜,雜反應(yīng)較多,必需經(jīng)過一段延遲時(shí)間才能進(jìn)入穩(wěn)定反應(yīng)期,各試劑商對(duì)這兩段時(shí)間有嚴(yán)格規(guī)定。所以動(dòng)態(tài)法測試一般溫度在37℃,延遲時(shí)間不少于15秒為好。
3、對(duì)于參數(shù)的輸入應(yīng)按試劑要求輸入其給定值,一般試劑商在試劑盒說明書中給予說明。
4、反應(yīng)溫度。
5、測試空白要準(zhǔn)確。
6、吸液量的大小直接影響交叉污染和測量的重復(fù)性,建議測試污染性大的物質(zhì)試劑量應(yīng)相應(yīng)增加。一般應(yīng)大于400μl,一般項(xiàng)目為500μl即可。
7、測試不準(zhǔn)確、重復(fù)性差從操作上看主要有:儀器本身原因如比色杯中有氣泡;光源燈老化;光源電壓不穩(wěn);340nm濾光片性能變差,透射性變小;波長不準(zhǔn)確等有關(guān)。一般檢查液路接口是否松動(dòng)漏氣,更換光源燈泡和340nm濾光片即可解決。至于電路問題,加熱元件損壞,溫度不受控的問題只能由工程師解決。
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