總*酶聯免疫分析（ELISA）試劑盒操作步驟

操作步驟

1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔 10 孔，在第一、第二孔中分別加標 準品 100μl，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液 50μl，混勻；然后從*孔、第二 孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl， 混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉，再各取 50μl 分別加到第五、第六孔 中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各 取 50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl，混 勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準 品稀釋液 50μl，混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為 50μl， 濃度分別為 30ng/L，20ng/L ， 10ng/L，5ng/L， 2.5ng/L）。

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣 品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣 品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混 勻。 總*酶聯免疫分析（ELISA）試劑盒

3.    溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.    配液：將 25 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 25 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復 5 次，拍干。

6.    加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

7.    溫育：操作同 3。

8.    洗滌：操作同 5。

9.    顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15 分鐘.

10.  終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.  測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD  值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的    總*酶聯免疫分析（ELISA）試劑盒

OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標 準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數， 即為樣品的實際濃度。