玻璃珠法柱式真菌DNAout
產品及特點 真菌DNA提取是一個難題,一是因為真菌有菌絲體、孢子等多種*不同的結構形態,二是因為其細胞壁一般都很厚,比較難以破碎。本產品是液氮研磨法柱式真菌DNAout的姊妹產品,它利用玻璃珠法破碎細胞,主要用于從真菌孢子和液體培養的真菌細胞中提取DNA(液氮研磨法柱式真菌DNAout采用液氮研磨法破碎細胞,適用于從真菌菌絲體中提取其基因組DNA)。本產品具有下列特點:
1. 即開即用,提供包括玻璃珠、離心吸附柱在內的所有試劑和耗材。
2. 采用玻璃珠法破碎細胞,屬于物理方法,遠比基于蝸牛酶或破壁酶的溫和化學破壁法重復性好,也不容易帶入外援真菌DNA(注:文獻報道蝸牛酶或破壁酶中常常有外源真菌DNA污染,用于提取真菌DNA往往會造成污染。這些文獻可從本公司本產品介紹網頁下方下載)。
3. 本方法提取一個樣品只需要10余分鐘,方便、快速和。
4. 一次可以處理5 mL的過夜真菌培養物,所得的基因組DNA OD260/OD280一般都在1.8左右,長度一般在20 kb左右,每mL菌液的DNA產率一般在1-3ug。可以直接用于PCR和酶切等后續試驗。
規格及成分 成 分 50 次包裝
酸洗玻 璃 珠,400 um 25 g
溶液A 25 mL
溶液B 25 mL
溶液C 75 mL
離心吸附柱 50套
通用洗柱液 50 mL
DNA洗脫液 10 mL
使用手冊 1份
運輸及保存 常溫運輸及保存,保存期為一年。
自備試劑 無
使用方法 1. 對菌液:取3-5 mL過夜培養的真菌菌液 (OD600一般在1以上)到干凈的塑料離心管中,12000 rpm離心2分鐘棄上清留沉淀。
2. 對菌落:用接種針在在培養基上刮取盡可能多的真菌菌落,轉移到裝有1mL水的干凈的塑料離心管中,洗滌下接種環上的菌體。12000 rpm離心2分鐘棄上清留沉淀。
3. 對孢子材料,一般取0.1g左右,直接加入到離心管中,然后進入下一步操作。
4. 在材料中加入無菌水1mL,振蕩半分鐘后12000rpm離心2分鐘棄上清留沉淀。
5. 沉淀中加入500 uL溶液A和0.5克的玻璃珠,渦旋震蕩10分鐘。
6. 加入500uL的溶液B,渦旋震蕩,12000rpm離心2分鐘,將上清液全部轉移到一個5mL的干凈的塑料離心管中。或者每管0.3mL,分別轉移到2-3個1.5mL的干凈的塑料離心管中。
7. 在上清中加入3倍體積的溶液C,顛倒數次混勻后,分三次上離心吸附柱,每次上柱后均先室溫放置2分鐘,然后12000rpm離心1分鐘,倒掉穿透液,再第二次上柱,重復上面的操作,直到掛柱步驟完成。
8. 在離心吸附柱中加入500 uL通用洗柱液,12000rpm離心1分鐘,倒掉穿透液。
9. 重復上步操作一次。
10. 12000rpm空柱離心1分鐘。
11. 加入50-100 uL DNA洗脫液,室溫放置1分鐘以上,12000rpm離心1分鐘,穿透液即為真菌DNA樣品。
12. 為了得到更多的DNA樣品,可以重復上步操作1-2次。
13. 所得DNA即可立即使用或放冰箱長期保存。
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